페니실라민
C5H11NO2S 149.21
d-발린, 3-메르캅토-.
d-3-메르캅토발린 [52-67-5].
» 페니실라민에는 건조 기준으로 계산하여 C5H11NO2S가 97.0% 이상 102.0% 이하로 함유되어 있습니다.
포장 및 보관- 단단한 용기에 보관하세요.
USP 참조 표준<11>-
USP 페니실라민 RS
USP 페니실린 G 칼륨 RS
USP 페니실라민 디설파이드 RS
C10H20N2O4S2
신분증-
A: 적외선 흡수<197M>(300mg 중 50mg).
B : 이 약 10mg을 물 5mL에 녹이고 5N 수산화나트륨 1방울 및 닌히드린 20mg을 첨가하면 즉시 청색 또는 자색을 나타낸다.
다 : 이 약 20 mg을 물 4 mL에 녹이고 인텅스텐산용액(1 → 10) 2 mL를 넣어 거의 끓을 때까지 가열하면 즉시 진한 청색을 나타낸다.
특정 회전 <781S>: 60.5에서 64.5 사이.
시험 용액: 1.0N 수산화나트륨에 50mg/mL.
pH<791>: 용액 내 4.5~5.5(1/100).
건조감량<731>- 이 품목 약 100mg을 정확하게 달아 모세관병에 넣고 진공중 수은압 5mm 이하의 압력으로 60℃에서 3시간 건조할 때, 감량은 중량의 0.5% 이하이다.
강열잔류물<281>: 0.1% 이하, 탄 잔유물에 질산 2mL 및 황산 5방울을 적신다.
중금속, 방법 II<231>: 0.002% 이하.
페니실린 활성 제한-
pH 2.5 버퍼- 제1인산칼륨 100g을 물에 녹이고 염산 0.2mL를 가하여 물을 넣어 1000mL로 하여 섞는다. 필요한 경우 인산이나 10N 수산화칼륨을 사용하여 pH 2.5로 조정합니다.
표준 준비- mL당 100 페니실린 G 단위와 mL당 0.005 페니실린 G 단위에서 mL당 0.2 페니실린 G 단위까지의 6가지 시험 희석액을 포함하는 최종 원액을 준비하고 mL당 0.050 페니실린 G 단위 표준의 중간 용량을 사용하는 것을 제외하고 표 1의 항생제-미생물 분석 81에 있는 페니실린 G에 대해 지시된 대로 준비합니다.
시험 준비- 이 액 9.0 mL를 물에 녹여 18.0 mL로 하고 이 액 9.0 mL를 분액액에 취하고 아밀아세테이트 20 mL 및 pH 2.5 완충액 1 mL를 넣어 흔들어 섞는다. 층이 분리되도록 하고, 수성층을 두 번째 분리기로 빼내고 첫 번째 분리기에 아밀 아세테이트 추출물을 유지합니다. 수층의 pH를 확인하여 3.0보다 크면 염산을 넣어 pH 2.5로 조정하고 초산아밀 20mL로 추출한다. 수층을 버리고 아밀아세테이트 추출물을 첫 번째 분리기에 첨가합니다. 결합된 아밀 아세테이트 추출물을 희석된 pH 2.5 완충액(1 → 10) 10mL로 세척하고 수층을 버립니다. 10.0 mL의 완충액 1번으로 아밀 아세테이트를 추출합니다(항생제 - 미생물 분석 81의 배지 및 희석제 섹션에서 인산염 완충액 및 기타 용액 참조). 완충추출액의 일부를 검액A로 한다. 추출물 5mL에 페니실리나제시액 0.1mL를 첨가하고 36~37.5℃에서 60분간 배양한다(검액B).
접종원 준비- Micrococcus luteus(ATCC 9341)를 시험 유기체로 사용하여 Antibiotics-Microbial Assays 81의 지침에 따라 준비하고, 표준 용량 수준 중앙값에서 직경 17mm~21mm의 명확하고 날카로운 억제 영역을 제공하는 접종원을 준비합니다.
절차- 베이스 레이어에 배지 1 10mL를 사용하고 시드 레이어에 접종된 배지 4 4mL를 사용하고 각 테스트 플레이트를 제외하고 플레이트를 29~31에서 배양하여 항생제-미생물 분석 81의 실린더-플레이트 방법에 따라 진행합니다. 2개의 실린더에는 시험 용액 A, 2개의 실린더에는 시험 용액 B, 2개의 실린더에는 표준 용량의 중앙값을 채웁니다. 시험 용액 A에서 억제 구역이 나타나지 않으면 시험은 페니실린에 대해 음성입니다. 시험 용액 A에서는 억제 구역이 나타나고 시험 용액 B에서는 나타나지 않으면 페니실린이 존재하는 것입니다. 표준곡선에서 농도를 결정한다. 시험용액 A의 각 mL에는 페니실린 G 단위가 0.01(g당 0.2 페니실린 G 단위) 이하이다.
수성-
[참고-수은 디티조네이트는 빛에 민감합니다. 이 테스트는 어두운 곳에서 수행하세요.]
디티존 스톡 솔루션- 클로로포름 1000mL에 디티존 40mg을 녹입니다.
디티존 적정제- Dithizone 스톡 용액 30.0mL를 클로로포름으로 100.0mL로 희석합니다. 이 용액에는 L당 약 12mg의 디티존이 포함되어 있습니다.
표준용액- 염화수은 135.4mg을 100mL 메스플라스크에 넣고 0.25N 황산을 넣어 섞는다. 이 용액에는 100mL에 100mg의 Hg가 포함되어 있습니다.
희석표준액- 표준용액 2 mL를 100 mL 메스플라스크에 넣고 0.25 N 황산을 넣어 섞는다. 이 용액의 각 mL에는 20 µg의 Hg가 포함되어 있습니다.
표준화- 희석표준용액 1 mL를 250 mL 분리기에 넣고 0.25 N 황산 100 mL, 물 90 mL 및 히드록실아민염산염용액(1 → 5) 10 mL를 첨가한다. 다음에 에데테이트이나트륨용액(1 → 50) 1 mL, 빙초산 1 mL 및 클로로포름 5 mL를 넣고 1 분간 흔들어 섞은 후 분리하여 클로로포름층을 버린다. 용액에 10-mL 뷰렛에서 0.3mL~0.5mL씩 Dithizone 적정제를 추가합니다. 각 첨가 후 혼합물을 20회 흔들어 클로로포름층이 분리되도록 하여 버립니다. 진탕 후에 Dithizone 적정제 첨가가 녹색으로 남을 때까지 계속합니다. 20을 첨가된 디티존 적정제의 mL 수로 나누어 디티존 적정제 1mL에 해당하는 수은의 양(μg)을 계산합니다.
절차- 페니실라민 500mg을 몇 개의 유리구슬이 들어 있는 650mL 킬달플라스크에 옮기고 플라스크를 약 45도 각도로 기울인 다음 플라스크 입구에 있는 작은 깔대기를 통해 질산 2.5mL를 첨가합니다. 아산화질소 연기가 방출되고 격렬한 반응이 가라앉을 때까지(5~30분) 혼합물을 실온에 방치합니다. 깔대기에 황산 2.5 mL를 넣어 처음에는 약하게 가열한 후 삼산화황 연기가 발생할 때까지 식힌다. 여기에 질산 2.5mL를 조심스럽게 가하고 다시 가열하여 삼산화황 연기가 생성될 때까지 식힌다. 질산처리와 가열을 반복한 후 식힌 다음 조심스럽게 물 50 mL를 넣고 깔때기를 헹구고 헹군 액을 플라스크에 모은다. 깔때기를 제거하고 용액을 약 절반(약 25mL)으로 끓인 다음 실온으로 냉각합니다. 물을 넣어 250mL 분리기에 옮기고 물을 넣어 약 50mL로 한다. 에데테이트이나트륨용액(1 → 50) 1 mL 및 빙초산 1 mL를 넣고 마지막 클로로포름 추출물이 무색이 될 때까지 클로로포름 소량으로 추출한다. 클로로포름 추출물을 버리고 0.25N 황산 50mL, 물 90mL 및 염산히드록실아민시액(1 → 5) 10mL를 넣는다. 10-mL 뷰렛에서 Dithizone 적정제를 0.3mL~0.5mL씩 추가합니다. 각 첨가 후 혼합물을 20회 흔들어 클로로포름층이 분리되도록 하여 버립니다. 진탕 후에 Dithizone 적정제 첨가가 녹색으로 남을 때까지 계속합니다. 존재하는 수은의 양을 계산하십시오. 한도는 10 µg(0.002%)입니다.
페니실라민디설파이드의 한도-
희석액, 이동상, 분리액-Assay에 따라 준비합니다.
표준 준비- 정확하게 계량된 양의 USP 페니실라민 이황화물 RS를 희석제에 녹여 약 0.025 mg/mL의 알려진 농도를 갖는 용액을 얻습니다.
시험 준비- 분석 준비를 사용합니다.
크로마토그래피 시스템- 분석의 지시에 따라 진행합니다. 표준 준비를 크로마토그래피하고 절차에 따라 페니실라민 이황화물 피크 반응을 기록합니다. 반복 주입에 대한 상대 표준 편차는 2.0%를 넘지 않습니다.
절차- [참고-피크 반응이 나타나는 피크 영역을 사용하십시오.] 표준액과 검액을 같은 부피(약 20 μL)씩 별도로 크로마토그래피에 주입하고 크로마토그램을 기록한 다음 페니실라민 이황화물 피크에 대한 반응을 측정합니다. 다음 공식에 따라 페니실라민에 포함된 페니실라민 이황화물(C10H20N2O4S2)의 비율을 계산합니다.
100(CS/CU)(rU/rS)
여기서 CS는 표준액 중 USP 페니실라민 이황화물 표준품의 농도(mg/mL), CU는 검액 중 페니실라민의 농도(mg/mL), rU 및 rS는 각각 검액 및 표준액에서 얻은 페니실라민 이황화물 피크 반응이며, 이황화 페니실라민의 함량은 1.0% 이하입니다.
분석-
희석제- 에데테이트이나트륨 1.0g을 물에 녹여 1000mL로 한다.
이동상- 일염기성인산나트륨 6.9g과 1헥산술폰산나트륨 0.20g을 물에 녹여 1000mL로 한다. 인산을 사용하여 pH 3.0 ± 0.1로 조정하고 다공성이 1μm 이상인 적절한 필터로 여과합니다. 필요한 경우 조정하십시오(크로마토그래피<621>의 시스템 적합성 참조).
해결 솔루션- mL당 USP 페니실라민 RS 약 1mg과 USP 페니실라민 디설파이드 RS 0.1mg을 함유한 희석액에 용액을 준비합니다.
표준 준비- 정확하게 달아서 USP 페니실라민표준품을 희석액에 녹여 약 1.25mg/mL 농도의 용액을 얻습니다.
분석 준비- 이 약 약 125 mg을 정확하게 달아 100 mL 용량플라스크에 넣고 희석액을 넣어 녹여 표선까지 희석하여 혼합한다.
크로마토그래피 시스템(크로마토그래피<621> 참조)-액체 크로마토그래피에는 210-nm 검출기와 패킹 L1을 포함하는 3.9-mm × 30-cm 컬럼이 장착되어 있습니다. 유속은 분당 약 1.6mL입니다. 분해능 용액을 크로마토그래피하고 절차에 따라 반응을 기록합니다. 상대 체류 시간은 페니실라민의 경우 약 0.7이고 페니실라민 이황화물의 경우 1.0이며 페니실라민 피크와 페니실라민 이황화물 피크 사이의 분해능 R은 3.0 이상입니다. 표준 준비를 크로마토그래피하고 절차에 따라 지시된 대로 반응을 기록합니다. 반복 주입의 상대 표준 편차는 1.0%를 넘지 않습니다.
절차- [참고-피크 응답이 표시되는 피크 영역을 사용하십시오. ] 표준액과 정량액을 각각 동량(약 20μL)씩 크로마토그래피에 주입하고 크로마토그램을 기록하고 주요 피크에 대한 반응을 측정합니다. 다음 공식에 따라 페니실라민 부분에서 페니실라민(C5H11NO2S)의 양을 mg 단위로 계산하십시오.
100C(rU/rS)
여기서 C는 표준액에 포함된 USP 페니실라민 RS의 농도(mg/mL)이고, rU와 rS는 각각 정량액과 표준액에서 얻은 페니실라민 피크 반응입니다.