L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl(H-Phe(4-NO2)-OMe·HCl)(CAS: 17193-40-7)의 분석 방법
설명: 깨끗하고 건조한 페트리 접시에 시료 약 2g을 넣고 시료의 외관을 관찰한다. 보고: 관찰 내용을 보고합니다.
확인: HPLC에 의한 크로마토그래피 순도로 얻은 시스템 적합성 제조 크로마토그램의 주요 피크 유지 시간과 시험 제제 크로마토그램의 주요 피크 유지 시간을 비교합니다.
건조감량 : 유리로 된 얕은 칭량병을 105±2℃에서 30분간 건조시킨다. 데시케이터에서 실온으로 식혀줍니다. 칭량병의 마개를 정확하게 달아 무게(W1)를 기록한다. 시험물질 약 1~2g을 정확하게 칭량하여 계량병에 넣는다. 가볍게 옆으로 흔들어서 시험편을 약 5mm 깊이까지 가능한 한 균일하게 분포시킵니다. 적재된 계량병의 무게를 측정하고 무게(W2)를 기록합니다. 로드된 병을 건조 오븐에 넣고 마개를 제거한 후 챔버에도 그대로 둡니다. 시험 시료를 105±2℃에서 3시간 동안 건조시킨다. 챔버를 개봉한 후에는 즉시 병을 닫고 데시케이터에 넣어 실온에 두십시오. 칭량병의 무게를 마개로 정확하게 단 후 분동(W3)을 다시 측정합니다. 다음 공식을 사용하여 샘플 건조 시 손실률을 계산합니다.
건조 감량 계산(% w/w)= (W2-W3) ¼ (W2-W1) x 100
HPLC에 의한 거울상 이성질체 함량:
화학물질 및 시약:
n-헥산 AR 등급
메탄올 HPLC 등급
이소프로필 알코올 HPLC 등급
디에틸아민 AR 등급
표준: L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 표준; L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 거울상 이성질체 표준
이동상: n-헥산, 이소프로필 알코올, 메탄올 및 디에틸아민(65:20:15:0.1 v/v/v/v)의 균질한 혼합물을 준비합니다.
블랭크 제조: 메탄올 2.5ml를 10ml 용량 플라스크에 옮기고 이동상으로 해당 용량까지 희석한 후 혼합합니다.
시스템 적합성 준비:
정확하게 무게를 재고 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 표준품과 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 거울상 이성질체 표준품 각각 약 5 mg을 10-ml 용량 플라스크에 옮기고 약 2.5ml의 메탄올에 녹인 다음 이동상으로 부피를 희석하고 혼합합니다.
시험 준비:
시료 약 5mg을 정밀하게 달아 10μmol 메스플라스크에 옮기고 메탄올 약 2.5ml를 넣어 녹인 후 이동상으로 적당량까지 희석하여 혼합한다.
기기 매개변수:
기기: 주입기, 펌프, UV 검출기 및 기록 장치가 장착된 HPLC
컬럼: ChiralPak-IC(4.6mm x 250mm) 5μ 또는 등가물
유속: 1.0ml/분
파장: 260nm
주입량: 10μL
컬럼 온도: 25℃
런타임: 20분
절차
다음 순서에 따라 용액을 주입합니다. 크로마토그램을 기록하고 기준을 확인합니다.
주사 횟수 기준에 대한 설명
공백 준비 1 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 또는 거울상 이성질체의 머무름 시간에 간섭 피크가 관찰되지 않아야 합니다.
시스템 적합성 준비 1 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl과 거울상 이성질체 피크 사이의 분해능은 2.0 이상이어야 합니다.
테스트 준비 1 테스트 크로마토그램을 사용하여 샘플의 거울상 이성질체 함량을 확인합니다.
상대적 보존 시간:
L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 1.0
거울상이성질체 1.11에 대하여
L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl의 체류 시간은 약 9.8분입니다.
계산: 테스트 준비에서 얻은 크로마토그램에서 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 및 거울상이성질체를 예상하는 모든 피크를 무시합니다. 면적 정규화 방법으로 샘플의 거울상 이성질체 함량을 보고합니다.
HPLC를 통한 크로마토그래피 순도 및 불순물:
화학물질 및 시약:
인산이암모늄 AR 등급
인산 AR 등급
메탄올 HPLC 등급
정제수
표준
L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 표준
4-니트로-L-페닐알라닌 일수화물 표준품
이동상-A
정제수 1000ml에 인산이암모늄 6.6g을 녹인다. 인산을 사용하여 이 용액의 pH를 6.0으로 조정합니다. 필터 및 가스 제거. 용액의 pH를 측정하기 전에 표준 완충액 pH 4.01 AND 7.00으로 pH 측정기를 교정하십시오.
이동상-B
메탄올 HPLC 등급
시스템 적합성 준비
정확하게 무게를 재고 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 표준품과 4-니트로-L-페닐알라닌 일수화물 표준품 각각 약 25mg을 50-ml 용량 플라스크에 넣고 용해시켜 메탄올로 희석하여 혼합합니다.
시험 준비:
정확하게 무게를 측정하고 약 25 mg의 샘플을 50-ml 부피 플라스크에 옮기고 메탄올에 용해시켜 부피만큼 희석하고 혼합합니다.
기기 매개변수:
기기: 주입기, 펌프, UV 검출기 및 기록 장치가 장착된 HPLC
컬럼: XTerra RP-18(4.6mm x 150mm) 5 μ 또는 등가물
유속: 1.0ml/분
파장: 265nm
주입량: 20μL
컬럼 온도: 25℃
상영시간: 45분
그라데이션 프로그램
시간(분) 이동상-A % 이동상-B %
0.01 90 10
15 60 40
35 40 60
40 35 65
41 90 10
45 90 10
절차:
다음 순서에 따라 용액을 주입합니다. 크로마토그램을 기록하고 기준을 확인합니다.
바탕 준비 1 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl의 머무름 시간에 간섭 피크가 관찰되지 않아야 합니다.
시스템 적합성 준비 1 L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 피크에 대한 테일링 인자는 2.0 이상이어야 합니다.
테스트 준비 1 테스트 크로마토그램을 사용하여 크로마토그래피 순도와 불순물을 확인합니다.
상대적 보존 시간:
L-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 1.0 (체류 시간 약 11.4분)
4-니트로-L-페닐알라닌 약 0.4
톨루엔 약 2.3
계산:
시험작성시 얻은 크로마토그램에서 공시험료를 보정한 후 톨루엔으로 인한 피크는 무시한다. 면적 정규화 방법을 사용하여 시료의 크로마토그래피 순도, 4-니트로-L-페닐알라닌 함량 및 총 불순물을 보고합니다.